随着Multi-CUT&Tag试剂盒的推出，越来越多科研工作者咨询Multi-CUT&Tag的一些相关问题，今天，我们来对Multi-CUT&Tag技术原理进行最全解析。
实验原理：利用ConA磁珠捕获细胞并利用5% Digitonin对细胞膜进行穿孔，选择鼠源一抗和兔源一抗实现同一细胞双靶标研究，之后，鼠源一抗结合Anti-mouse Tn5、兔源一抗结合Anti-rabbit Tn5从而定向切割不同靶标靶向的目标蛋白结合DNA序列，再经过PCR完成二代测序文库的构建。对文库进行测序后的数据进行barcode拆分，即可获得双靶标的高分辨率靶蛋白结合的染色质图谱。
图：Multi-CUT&Tag实验流程
Multi-CUT&Tag试剂盒为即用型试剂盒，试剂盒中含有Box I和Box II，存放温度不一致。试剂盒中，包含Digitonin和纯化磁珠，客户准备好样品、磁力架、PCR仪、涡旋仪以及所需实验的鼠抗和兔抗，搭配固定货号接头，即可完成实验。
2022年12月，Gonçalo Castelo-Branco课题组在Nature Biotechnology上发表的Multimodal chromatin profiling using nanobody-based single-cell CUT&Tag上推出了使用纳米抗体-Tn5融合蛋白的nano-CUT&Tag（nano-CT），通过Anti-mouse Tn5和Anti-Rabbit Tn5，在鼠脑中实现特异性针对鼠抗和兔抗的Multi-CUT&Tag技术应用，非常详细地解剖大脑中的祖细胞如何特化成少突胶质细胞，这些新的机制见解可以为我们在疾病背景下如何刺激少突胶质细胞群的恢复提供线索。
图：nano-CUT&Tag (nano-CT)在单细胞技术中的应用
nano-CUT&Tag能减少实验流程，并且在单细胞水平背景更低，同时分群结果更明显。
Multi-CUT&Tag技术在不同免疫细胞中的研究应用
2022年12月，美国纽约基因组中心Ivan Raimondi团队Nature Biotechnology上发表的Nanobody-tethered transposition enables multifactorial chromatin profiling at single-cell resolution上推出NTT-seq，在不同细胞中使用纳米抗体偶联的Tn5酶实现了同一份细胞多个靶标的研究，同时该研究在PBMCs和BMMCs中进行单细胞多靶标CUT&Tag研究时，也能获得非常优秀的高分辨率的多模态图。同时，研究人员还扩展了NTT-seq，使细胞表面蛋白表达和多模态染色质状态的分析同时进行，可用于研究免疫系统的细胞。
图：NTT-seq在不同细胞中实现bulk多靶标的染色质图谱
[1] B. M, CB G. Multimodal chromatin profiling using nanobody-based single-cell CUT&Tag [published online ahead of print, 2022 Dec 19]. Nat Biotechnol. 2022;10.1038/s41587-022-01535-4. doi:10.1038/s41587-022-01535-4[IF:68.164]
[2] Stuart T, Hao S, Zhang B, et al. Nanobody-tethered transposition enables multifactorial chromatin profiling at single-cell resolution [published online ahead of print, 2022 Dec 19]. Nat Biotechnol.
Multi-CUT&Tag技术最全原理解析
