表1. 普通款和热敏款蛋白酶K特点比较
在分子生物学研究领域,蛋白酶K凭借卓越的蛋白降解性能,始终是核酸提取与样本裂解等核心实验步骤的关键工具。其通过高效裂解细胞并降解蛋白质,为核酸的快速释放与纯化奠定基础。然而,传统蛋白酶K在实际应用中暴露出显著的技术瓶颈:灭活过程复杂且风险高。无论是采用苯酚/氯仿抽提的多步骤纯化流程,还是高温处理引发的样本降解风险,都可能导致实验周期延长、结果重现性降低,进而影响后续数据分析的准确性与可靠性。
为突破这一技术壁垒,翌圣生物成功研发并推出热敏蛋白酶K(Thermolabile Proteinase K,Cat#14809)产品,该产品只需在55℃条件下加热10分钟即可实现完全灭活,无需额外的核酸纯化步骤,有效避免了酶残留对下游实验的干扰。例如:Thermolabile Proteinase K应用于直扩PCR、DNA&RNA建库等实验中,可省略多次纯化流程,有效降低核酸损耗,提升样本利用率;应用于甲基化DNA分析过程中,通过精准控制酶解条件,避免因过度消化导致的甲基化位点破坏,确保实验结果的准确性与可靠性。
产品简介
Thermolabile Proteinase K
Thermolabile Proteinase K(TLPK)是通过基因工程技术改造获得的重组丝氨酸蛋白酶,保持了与野生型版本相似的活性和特异性,具备广泛的切割活性,能够高效水解多种类型的肽键。在理化性质方面,TLPK展现出良好的缓冲液兼容性,可在多种缓冲体系中保持活性。其最适反应条件为pH 7.0-9.5、温度20-40℃,在此区间内能够发挥最佳效能。该酶具备优异的热敏感性,只需在55℃条件下温育10分钟即可完全热失活。
消化能力强、热敏感
分别使用翌圣及进口品牌Supplier A的TLPK处理限制性内切酶PvuII后,使用处理后的PvuII对λDNA进行处理,结果显示翌圣TLPK可有效抑制PvuII活性,且55℃条件下温育10分钟可使TLPK完全热失活,对后续反应体系中的添加的蛋白无影响。
图1.消化能力与热敏感性能验证
无核酸外切酶、切口酶、RNase残留
将0.12 U TLPK分别与核酸底物孵育,并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明,翌圣的3个批次TLPK均未检测到核酸外切酶、切口酶或RNase残留,为实验结果的准确性和可靠性提供了有力保障。
图2.核酸外切酶、切口酶、RNase残留结果验证
为满足多样化实验需求,翌圣生物精心推出蛋白酶K系列产品,涵盖普通型与热敏型两大品类。普通型蛋白酶K适用于常规蛋白降解场景,而热敏型产品则凭借快速热灭活特性,为下游分子生物学实验提供高效解决方案,为科研工作者提供精准适配的实验工具选择。
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
产品特点 |
10401ES |
100mg/1g/5 g/100g |
粉末状,可以根据实验要求,配制成目标浓度 |
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10412ES |
1 mL/10 mL/25 mL/500 mL |
液体,免配制,使用起来更方便 |
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10410ES |
1 mL/5 mL/100 mL/1000 mL |
极低的背景菌残留,更适合病原微生物核酸提取 |
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Thermolabile Proteinase K |
14809ES |
30 U/120 U |
热敏款,适用于反应后需在温和条件下去除蛋白酶K活性的场景或热敏感样本的处理 |