Exonuclease III是一种核酸外切酶，该酶作用于双链DNA，从3’OH末端方向逐步切去单核苷酸。该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此该酶难以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特性可以用于生产特定方向的单链DNA，将线性化DNA设计成为一端为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端），此时Exonuclease III将仅消化一条链。

Exonuclease III的活性部分依赖DNA双螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。此外，该酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脱嘌呤/嘧啶（AP）位点特异性核酸内切酶活性。

• 该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口；
• 由于对单链DNA无活性，因此该酶难以切割3'突出末端；
• 3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。

-25~-15℃保存，有效期2年。