蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶（PAGE凝胶）来实现蛋白分离，此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成，前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用，后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。

本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系，其中包括快速制备免染PAGE凝胶（10%）所需的各种试剂，用户只需自备制胶设备即可配胶，大大简化了制胶过程。与PAGE凝胶快速制备试剂盒（10%）（Cat#20325ES）相比，无需染胶，蛋白条带紫外曝光即可成像，之后使用总蛋白归一化对靶蛋白进行定量，相比使用管家蛋白作为内参，更加准确有效。此外，也可观察Western Blot转印后膜上蛋白条带，验证转膜效果。

产品信息

本试剂盒所配制凝胶可用于变性免染PAGE凝胶电泳，也可用于非变性免染PAGE凝胶电泳。该规格可配制不同厚度的凝胶，配制数量分别为：0.75 mm厚度胶（约125块）、1.00 mm厚度胶（约90块）、1.50 mm厚度胶（约60块）。

1）紫外成像——无需染胶，蛋白条带紫外曝光即可成像；

2）制胶速度快——最少仅需2 min即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释；

3）彩色浓缩胶——浓缩胶呈彩色，为点样提供最大便利，所含颜色配方不影响电泳、染色及转膜等后续应用；

4）安全无异味——无需使用TEMED，避免接触过硫酸铵粉末，远离有毒试剂；

5）稳定性高——试剂盒配套提供的硫酸铵催化剂溶液属改良型APS，其稳定性和催化效能都得到大大提升。

6）一步法灌胶——可无需封闭分离胶，直接添加浓缩胶。

建议配胶时不要一次性配置太多块胶，避免来不及添加上层液（推荐最多2-3块）

1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度【参考附表1】

2 制胶流程（以一块0.75/ 1.0/ 1.5 mm的胶为例）

1）取等体积分离胶缓冲液和分离胶溶液混匀，即取两种溶液各2.0/ 2.7/ 4.0 mL。

2）往步骤1中的混合溶液中加入40/ 55/ 80 μL的改良型过硫酸铵溶液（凝固太快可减半过硫酸铵使用量），充分混匀。

3）将步骤2中的溶液注入制胶玻璃板中。注意加入分离胶后要在2 min内将浓缩胶注入凝胶模具内，且在灌注浓缩胶时要缓慢，防止浓缩胶与分离胶混合在一起。如果个人觉得配置困难，也可改编为自行用乙醇封闭之后再进行配置浓缩胶。

4）浓缩胶的配置：取等体积浓缩胶缓冲液和浓缩胶溶液混匀，即取两种溶液各0.5/ 0.75/ 1.0 mL，然后加入10/ 15/ 20 μL的改良型过硫酸铵溶液，充分混匀。

5）注入制胶玻璃板中，插入梳齿（插胶梳时切勿用力过猛，轻轻插入）。

6）待15 min浓缩胶凝固后，拔去梳齿即可用于电泳。注：请尽量使用新鲜配置的电泳缓冲液。

7）电泳结束后，即可将凝胶从玻璃板中取出，放入成像仪紫外（波长 302 nm）曝光成像，或在紫外切胶台上直接观察。

注意：紫外激发荧光基团需一定时间，一般经 1~5 min，凝胶上即可呈现清晰的蛋白条带；

观察 Western Blot 转印后膜上蛋白条带，必须在电泳后，将凝胶经紫外激发出现清晰条带后，再进行转膜操作。若直接转膜再用紫外激发，荧光信号会很弱或无信号。

附表1. 不同浓度SDS-PAGE分离胶参考分离范围

2~8℃保存。其中F组分改良型过硫酸铵溶液如果长时间不用，需保存于-25~-15℃。有效期1年。